Safe Harbor ORF敲入克隆能通过TALEN或CRISPR介导的同源重组（HR），将客户感兴趣的基因ORF从供体克隆整合到人类或小鼠基因组的safe harbor位点。该供体克隆可搭配Safe Harbor 基因敲入试剂盒使用。试剂盒中的TALEN或CRISPR克隆能靶向剪切人类AAVS1或小鼠ROSA26 safe harbor位点，生成DNA双链断裂（DSB），在该位点诱发同源重组（HR）修复机制（图1）。目前这一系列敲入克隆有超过20,000条序列确证的人类ORF和超过20,000条序列确证的小鼠ORF可供选择。
图1: 基因组编辑工具介导的 safe harbor 基因敲入原理图
(B) >
图2. （A）人类 AAVS1 Safe Harbor ORF 敲入克隆；（B）小鼠ROSA26 Safe Harbor ORF 敲入克隆。
图6：以SOX2及OCT4为敲入基因的人类基因组AAVS1 safe harbor位点基因敲入实验。
（A）在六孔板上将OCT4(Cat#: DC-Z0092-SH01) 或SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 供体质粒与AAVS1 TALEN组合共转染到HEK293T细胞。转染48小时后细胞传代，以嘌呤霉素(1μg/ml)筛选2周。转染48小时或筛选2周后用显微镜(Nikon Eclipse Ti ) 检查CopGFP的表达情况。只用供体质粒转染的对照组在嘌呤霉素筛选后只有少量细胞存活（数据未展示）。
（B）对AAVS1位点稳定整合SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 或 OCT4 (Cat#: DC-Z0092-SH01) 的HEK293T细胞进行分析。同个印迹实验中,阴性对照（未经转染的HEK293T细胞）的内源SOX2或OCT4蛋白水平低至无法检出。
微信客服
QQ客服
