GLuc-ON™ 启动子报告克隆

GLuc-ON™ 启动子报告克隆在GLuc报告基因上游插入一段1.2~1.5 kb的序列，这段插入序列与基因转录起始位点（TSS）上游大约1.5kb到下游200bp之间的5'侧翼序列一致，可以通过观察荧光素酶的活性来研究启动子对基因的调节作用。

GeneCopoeia可提供预制和定制的GLuc-ON™ 启动子克隆，包括单报告基因载体系统和双报告基因载体系统。单报告基因载体系统以Gluc、 mCherry或GFP作为启动子的报告基因；双报告基因载体系统以Gluc作为启动子报告基因，以分泌型碱性磷酸酶 （SEAP）作为信号标准化的内参，可在活细胞中对超过20,000种人和18,000种小鼠启动子进行实时活性分析。

图1. GLuc-ON™ 启动子报告克隆的双报告基因检测原理图。

优势

Gaussia 荧光素酶

GLuc-ON™ 启动子克隆采用经过修饰的GLuc（mGLuc）作为报告基因，能产生强烈且稳定的荧光信号，克服了人野生型GLuc（wtGLuc）信号衰退快的缺点。

 

图2. mGLuc (蓝色) 和 wtGLuc (红色)的信号稳定性比较。左侧：含有稳定剂的缓冲液；右侧：常规缓冲液。

 

双报告系统

GLuc-ON™ 启动子克隆可以将分泌型碱性磷酸酶（SEAP）作为第二个报告子和内参。这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。

  

图3. 不同启动子在H1B1B和HEK293T细胞中的活性分析。双报告系统启动子克隆和对照以两个重复转染进两种细胞中。转染24小时（(HEK293T）和48小时（H1B1B）后分析样品。NEG（包含非启动子序列）和EMPTY（载体不含启动子）作为阴性对照。