• Cas9 稳定整合将 sgRNA 共转染或共转导操作的需求降到最低，是高通量 sgRNA 应用的理想选择。
• Safe Harbor 位点整合能确保稳定的 Cas9 表达，同时对细胞无副作用。
• 单克隆细胞系能保证单一基因背景下持续的、高水平的 Cas9 表达。
• 可配合Genome-CRISP™ sgRNA 克隆、sgRNA文库以及供体克隆服务使用。

图 1. Cas9 核酸酶稳定表达结构的示意图。Cas9 核酸酶基因被装载到到 GeneCopoeia 的人类 AAVS1 safe harbor 敲入克隆载体。该载体的结构配合 GeneCopoeia 的safe harbor 基因敲入技术，能将 Cas9 核酸酶基因敲入到人类第19号染色体上的 AAVS1 位点。单克隆分离通过嘌呤霉素（Puro）药筛实现。

人类基因组 AAVS1 位点上的稳定整合确保了 Cas9 核酸酶基因持续稳定的表达。通过以下的 T7 核酸内切酶 I 错配酶切检测，我们可以看到 在 AAVS1 位点上 的Cas9 核酸酶基因表达量及活性水平都相当高。

图 2. 稳定表达细胞系活性验证。用靶向 HUWE I 基因的 sgRNA 质粒转染 AAVS1 位点稳定整合 Cas9 核酸酶基因的人类 H1299 细胞系。24 小时后，收集细胞用于取基因组 DNA。使用GeneCopoeia IndelCheck 检测体系扩增sgRNA靶向的序列区，对 PCR 产物进行解链和退火处理，对照组不作处理，实验组用 T7 核酸内切酶进行错配酶切。实验组酶切产物跑胶获得预期的酶切条带，即能证明 Cas9 在这些细胞系中有活性。